تثبیت آنزیم نوترکیب ارگانوفسفر هیدرولاز (oph) بر روی سطح اسپور باسیلوس سوبتیلیس و تعیین خصوصیت پایداری حرارتی و پایداری آن در ph های مختلف

پایان نامه
چکیده

ترکیبات ارگانوفسفره به وفور در آفت کش ها و عوامل عصبی شیمیایی مورد استفاده قرار گرفته و خطرات زیادی را برای انسان و محیط زیست ایجاد نموده اند. گزارشات زیادی از سم زدایی این ترکیبات با روش های مختلف وجود دارد که از میان این روش ها، هیدرولیز آنزیمی این ترکیبات با آنزیم ارگانوفسفر هیدرولاز، بیشتر مورد توجه محققین واقع شده است. آنزیم ارگانوفسفر هیدرولاز یک پروتئین همو دایمر است که اولین بار از باکتری سودوموناس دیمینوتا و فلاوباکتریوم جدا شده که قادر به تجزیه گستره وسیعی از ترکیبات ارگانوفسفره سمی می باشد. استفاده از فرم تثبیت شده این آنزیم در مقابل فرم آزاد آن باعث افزایش پایداری آنزیم شده و هزینه ها را به واسطه امکان بازیافت و استفاده مجدد از آن کاهش می دهد. همچنین، با تثبیت آنزیم امکان جداسازی آسان و سریع آن از محیط واکنش نیز فراهم می گردد. در این مطالعه ژن کد کننده آنزیم نوترکیب ارگانوفسفر هیدرولاز در ناقل بیانی pet-26b (+) کلون شد و در میزبان e. coli bl21 (de3) plyss بیان و به محیط کشت باکتری ترشح گردید. سپس آنزیم بعد از خالص سازی، بر روی سطح اسپورهای باکتری باسیلوس سوبتیلیس به عنوان یک حامل جدید، به روش جذب سطحی و پیوند کووالان، برای اولین بار تثبیت گردید. تثبیت آنزیم بر روی سطح اسپور با روش های مختلفی مانند سنجش فعالیت آنزیمی اسپورها، وسترن بلات، فلوسایتومتری و میکروسکوپ فلورسنت تأیید گردید. نتایج این مطالعه نشان داد که در فرم تثبیت شده آنزیم ارگانوفسفر هیدرولاز به روش جذب سطحی، تقریباً حدود 42 تا 45 درصد از فعالیت آنزیم ارگانوفسفر هیدرولاز در ارتباط با اسپور ها حفظ شد و در ph و دمای بهینه فعالیت آنزیم با جذب بر روی اسپور، تغییری حاصل نشد، اما پایداری آنزیم متصل به اسپور در دما و ph های بالا بیشتر از فرم آزاد آنزیم بود. در تثبیت آنزیم به صورت کووالان، درصد تثبیت آنزیم بر روی سطح اسپورها، حدود 55 تا 60 درصد بود. تثبیت کووالان آنزیم بر روی سطح اسپور با روش های طیف سنجی ft-ir و میکروسکوپ الکترونی نگاره، بررسی و تأیید گردید. آنزیم تثبیت شده به صورت کووالان، بعد از 6 بار استفاده در واکنش های آنزیمی متعدد توانست، سوبسترای ارگانوفسفره پارااُکسون را بدون کاهش قابل توجه در فعالیت، تجزیه نماید. پایداری آنزیم ارگانوفسفر هیدرولاز تثبیت شده بر روی اسپور به صورت کووالان، در دما و ph های مختلف نسبت به فرم آزاد آنزیم بهبود یافت. با توجه به امنیت اسپور باکتری باسیلوس سوبتیلیس برای انسان و محیط زیست و همچنین هزینه پایین تولید و تخلیص اسپور، آنزیم تثبیت شده بر روی سطح اسپور، پتانسیل استفاده به عنوان یک بیوکاتالیست، برای تجزیه آلودگی های ارگانوفسفره در محیط و بیوراکتور ها را با کارایی بالا دارا می باشد.

منابع مشابه

تثبیت آنزیم ارگانوفسفر هیدرولاز بر سطح اسپور باکتری باسیلوس سوبتیلیس به روش جذب سطحی

هدف: ترکیبات ارگانوفسفره به وفور در آفت کش ها و عوامل عصبی شیمیایی استفاده شده است. آنزیم ارگانوفسفر هیدرولاز یک پروتئین همودایمر است که اولین بار از باکتری سودوموناس دیمینوتا و فلاوباکتریوم جدا شده است. این آنزیم قادر به تجزیه گستره وسیعی از ترکیبات ارگانوفسفره سمی است. استفاده از فرم تثبیت شده این آنزیم در مقابل فرم آزاد آن باعث افزایش پایداری آنزیم می­شود و قیمت آن را به واسطه امکان بازیافت ...

متن کامل

تثبیت آنزیم آلفا آمیلاز باسیلوس لکنی فورمیس بر سطح اسپور باسیلوس سوبتیلیس به روش غیر ژنتیکی

مزایای چشمگیر آنزیم های تثبیت شده از قبیل پایداری بیشتر آنزیم ،امکان استفاده چند باره از یک منبع آنزیمی و جداسازی آسان آن از مخلوط واکنش، سبب جلب توجه محققان در جهت گسترش روشهای تثبیت و استفاده از آنزیم های تثبیت شده گشته است. آنزیم آلفا آمیلاز یکی از پر کاربردترین آنزیم های صنعتی است که در صنایع مختلف، از جمله صنایع غذایی، نساجی،کاغذ سازی و تخمیری کاربرد دارد و تا کنون بر روی سطوح مختلف و با ر...

15 صفحه اول

جداسازی، استخراج و تخلیص آنزیم ارگانوفسفر هیدرولاز(oph)از منبع باکتریایی و تثبیت آن روی بیوپلیمر کیتوزان

ترکیبات ارگانوفسفره، گروهی از ترکیبات استر، آمید یا مشتقات تیولی فسفریک سمی هستند که بطور گسترده در کنترل حشرات و آفات بکار می‎روند. پس‎مانده‎های ترکیبات ارگانوفسفره در آبهای زیرزمینی، منابع آبی و غذاها، پس از جذب در بدن، باعث غیرفعال شدن آنزیم استیل کولین استراز و ایجاد عوارضی در موجود زنده می کنند. آنزیم ارگانوفسفرهیدرولاز (oph) یا فسفوتری استراز (pte)، آنزیم تجزیه کننده طیف وسیعی از ترکیبات ...

15 صفحه اول

کلونینگ و بیان ژن آنزیم ضد قارچ نوترکیب کیتیناز باسیلوس پومیلوس در باسیلوس سوبتیلیس 168

  سابقه و هدف: کیتین، پلی ساکارید خطی و یکی از فراوان‌ترین پلی ساکاریدهای طبیعی است که جزء اصلی ساختار دیواره سلولی بسیاری از موجودات است. کیتینازها، آنزیم‌های اصلی کاتالیز‌کننده کیتین به اجزاء مونومری و الیگومری‌ آن هستند و می‌توانند به عنوان یک عامل ضد قارچ طبیعی استفاده شوند. هدف از این تحقیق کلونینگ و بیان ژن نوترکیب کیتیناز در باکتری باسیلوس سوبتیلیس در درمان عفونت‌های قارچی و جای‌گزینی آن...

متن کامل

تثبیت آنزیم پروتئاز Penaeus vanamei بر روی نانولوله‌های کربنی و بررسی فعالیت و پایداری آن

پسماند صنعت آبزیان غنی از پروتئین بوده و بهترین راه بدست آوردن این مواد آلی استفاده از آنزیم‌های پروتئاز است. از این رو، انتخاب یک پروتئاز مقاوم از یک گونه آبزی و استفاده از یک بستر مناسب برای تثبیت و استفاده طولانی مدت آن بسیار با اهمیت است. در این پژوهش پروتئاز خالص شده از میگوی Penaeus vanamei روی نانولوله‌های کربنی چندجداره (MWCNTS) تثبیت شد. پس از فعال کردن نانولوله‌ها با اسید نیتریک، به م...

متن کامل

جداسازی و شناسایی باسیلوس تورنجینسیس سویه L26 به ‌عنوان سویه مولد آنزیم لیپاز و بررسی اثر عوامل مختلف بر روی فعالیت و پایداری آنزیم آن

سابقه و هدف: لیپازها مهم‌ترین آنزیم‌های هیدرولیتیک هستند که توسط میکروارگانیسم‌های مختلف از جمله باکتری‌ها تولید می‌شوند و در صنایع گوناگون مانند صنایع غذایی و دارویی کاربرد دارند. هدف از این مطالعه، جداسازی و شناسایی باکتری-های مولد لیپاز از منابع در دسترس جهت استفاده در صنعت است. مواد و روش‌ها: نمونه‌برداری و جداسازی باکتری‌های مولد آنزیم لیپاز از پساب و خاک تصفیه‌خانه حبیب‌آباد، پساب و...

متن کامل

منابع من

با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید

ذخیره در منابع من قبلا به منابع من ذحیره شده

{@ msg_add @}


نوع سند: پایان نامه

وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک وزیست فناوری

میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com

copyright © 2015-2023